藥品質(zhì)量管理規(guī)范(GxP)-合規(guī)性

與小化合物或傳統(tǒng)生物制藥的生產(chǎn)相比，病毒載體的生產(chǎn)存在的挑戰(zhàn)。一些挑戰(zhàn)包括起始材料(如質(zhì)粒、生產(chǎn)細(xì)胞系)的固有可變性、缺乏參考標(biāo)準(zhǔn)、插入突變的風(fēng)險(用于整合載體)、活性成分的使用和多種污染源。所有這些參數(shù)都直接影響最終治療產(chǎn)品的安全性和有效性，包括毒性、免疫原性、致癌性和脫落引起的環(huán)境風(fēng)險等方面。

與任何其他治療產(chǎn)品一樣，用于基因治療的病毒載體的開發(fā)和生產(chǎn)必須在臨床和商業(yè)產(chǎn)品生產(chǎn)期間遵循藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GMP)。GMP法規(guī)適用于生產(chǎn)工藝的每個步驟：人員、廠房、工藝、產(chǎn)品和流程。

符合GMP的病毒載體生產(chǎn)工藝必須確保病毒載體的效價(生物活性)、純度(無污染物或雜質(zhì))和安全性(無潛在有害物質(zhì))一致。為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，在生產(chǎn)過程中，通過測量關(guān)鍵的物理、化學(xué)、生物和微生物特性，并保證它們在適當(dāng)?shù)南薅?、范圍或分布范圍?nèi)，控制各種"關(guān)鍵質(zhì)量屬性" (CQA)。

評估這些CQA的快速、可靠和高通量分析方法在工藝開發(fā)和后續(xù)質(zhì)量控制(QC)期間符合GMP要求的批量釋放測試中至關(guān)重要。由于QC(GMP)的監(jiān)管要求高于研發(fā)(R&D)，因此在轉(zhuǎn)移前，必須對產(chǎn)品開發(fā)期間設(shè)計(jì)的分析方法進(jìn)行重新評估、更新和驗(yàn)證。

鑒于大多數(shù)自動化液體處理設(shè)備顯著提高了結(jié)果的可重復(fù)性和樣本的可追溯性(包括整合到實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)(LIMS)中)，因此它們本質(zhì)上適用于高監(jiān)管合規(guī)性。此外，其中一些自動化系統(tǒng)配備了將研發(fā)部開發(fā)的自動化方法(即流程開發(fā))轉(zhuǎn)移至符合GMP的QC檢測所需的所有功能。

分析方法-病毒載體生產(chǎn)過程中的常用技術(shù)

在生產(chǎn)過程中評估病毒鑒別、產(chǎn)量、效力、純度和安全性的最常見分析方法依賴于兩種主要技術(shù)的變化：酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)。其他分析方法包括陰離子交換色譜法、流式細(xì)胞術(shù)、毛細(xì)管電泳、動態(tài)光散射和電子顯微鏡。

盡管ELISA程序很簡單，但它包含許多重復(fù)的步驟，孵育時間很長，容易出現(xiàn)人工錯誤。

完整的ELISA檢測(從標(biāo)準(zhǔn)稀釋到讀板和結(jié)果報(bào)告)可以通過將臺面或外圍設(shè)備整合到自動液體處理設(shè)備上而實(shí)現(xiàn)自動化。此外，自動化有助于使用相同的樣品分裝平行運(yùn)行各種實(shí)驗(yàn)，提高整體通量并節(jié)約珍貴的樣品。

基于PCR的分析方法需要復(fù)雜的工作流程，手工操作時，工作流程高度分散 (如DNA/RNA提取、DNA/RNA質(zhì)量控制、PCR構(gòu)建、擴(kuò)增和檢測)，增加了出錯的可能性和樣品可追溯性方面的困難。與ELISA工作流程的自動化相似，PCR工作流程的自動化可以針對單個步驟或完整的工作流程來完成：“樣品到結(jié)果”解決方案。

除了end-point評估技術(shù)(即ELISA和PCR)的自動化之外，自動化液體處理流程還可以支持在最終評估之前進(jìn)行的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)，包括那些需要培養(yǎng)和處理細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)。其中兩種最常見的是檢測(i)感染性病毒滴度，一種測定病毒載體生物學(xué)功能的效價測定法和(ii)復(fù)制能力病毒(RCV)，一種評估病毒載體無法復(fù)制的安全性測定法。得益于新一代工作站中的吸頭技術(shù)和專用軟件，自動液體處理設(shè)備為處理細(xì)胞培養(yǎng)物提供了顯著的優(yōu)勢。這些自動化系統(tǒng)可以確保精確溫和的吸液和分液、受控的溫度和振蕩以及無菌性，以及允許整合第三方設(shè)備進(jìn)行自動化分析。

Hamilton提供的自動化解決方案

為了覆蓋廣泛的通量和整合能力，Hamilton自動化提供了三種平臺類別: (i) Microlab® VANTAGE系列用于高通量實(shí)驗(yàn)(35-60 SBS板位)和360°整合，包括Hamilton物流柜和后整合柜，(ii)Microlab® STAR™和STAR V系列, 用于中高通量的實(shí)驗(yàn)(25-60 SBS板位)和180-270°整合, 以及(iii)Microlab® NIMBUS和Microlab® Prep™, 用于低通量的入門級用戶(7-20 SBS板位) 。目前，所有Hamilton中高通量平臺都使用同一種Hamilton VENUS®軟件。入門級自動化我們的STAR™, STAR V和VANTAGE系列除了可以配備2-12的單通道移液頭，也可以配備96或384移液頭(MPH)， ML NIMBUS系列也可以配備一個單獨(dú)的96MPH。

得益于臺面模塊的多樣性，除了移液，Hamilton平臺還可以執(zhí)行多個步驟(如：加熱、振蕩、冷卻、開蓋、關(guān)蓋、將培養(yǎng)基輸送到臺面上、離心、pH測量、固相萃取、成像分析、條形碼或者2D碼閱讀)。 我們在制藥行業(yè)的項(xiàng)目經(jīng)常包括與讀板機(jī)、洗站、孵育器和成像系統(tǒng)等的第三方集成。